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Análisis bioquímica de bacterias

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El paso final para la identificación de una bacteria es dado por el Estudio de su bioquimismo. Para este estudio es crucial el aislamiento de las bacterias en cuestión, impidiendo la contaminación para impedir el error de identificación. Podemos realizar una serie de pruebas, optando por aquel que nos parece más adecuado.

Pruebas de Sensibilidad

  1. Pruebas de sensibilidad a la temperatura ambiente: Se aplica en la identificación de bacterias del género Mycobacterium por su crecimiento o no la temperaturas de 24, 31, 37 y 45ºC.
  2. Pruebas de tolerancia la condiciones hostiles del medio de cultura:Consisten en la cultura de bacterias en medios selectivos. Puede considerarse dentro de este grupo la lise del Streptococcus pneumoniae en presencia de la bílis, lo que lo distingue de otros estreptococos. Un otro ejemplo es el Staphylococcus aureus que resiste a medios con NaCl hasta 15% que inibem la mayor parte de la flora normal.
  3. Sensibilidad de los germens
    • Prueba de la optoquina: el Streptococcus pneumoniae es sensible a la optoquina distinguiéndose de los otros estreptococos que le son resistentes.
    • Prueba de la bacitracina: se utiliza en la caracterización de Streptococcus del grupo A de Lancefield, beta-hemolíticos y muy sensibles la bacitracina.
  4. Nutrientes indispensables: ES usado en la identificación de Haemophylus , probando su comportamiento frente a dos factores de crecimiento: factor X (Heme-ferroporfirina) y factor V (NAD).

Pruebas de Metabolismo

Las pruebas más importantes son aquellos que dicen respeto al metabolismo de la bacteria, y que en la gran mayoría de las veces están relacionados con la presencia de enzimas específicas. Así siendo, se hacen estudios sobre:

  1. Identificación de enzimas respiratorias
    • Investiga de la Catalase: es indispensable en la identificación de cocos gram positivos. Los estafilococos son catalase positivos, mientras que los estreptococos son catalase negativos.
    • Investiga de la Oxidase: se utiliza para diferenciar el género Neisseria (oxidase positiva) de otros cocos gram negativos y para distinguir la familia Enterobacteriaceae (oxidase negativa), de otros bacilos gram negativos (oxidase positiva).
  2. Metabolismo glicídico: La mayoría de las bacterias utiliza los hidratos de carbono hidrolizando-los hasta a la formación de ácidos con consecuente alteración del pH del medio. En algunos casos esa hidrólise conduce a la formación de gases.
  3. Metabolismo proteico y enzimas
    • Hidrólise de la gelatina: si la bacteria poseer la enzima gelatinase posee la capacidad de hidrolisar la gelatina y de liquefazer.
    • Producción de gas sulfídrico: la degradación de aminoácidos sulfurados o peptonas origina este compuesto, que al reaccionar con el citrato de hierro o acetato de plomo va a formar manchas de memoria negra a la superficie de la gelose.
    • Producción de indol : la degradación del triptofano da origen al indol, que después de un periodo de 24h, reaccionando con un compuesto específico (reagente de Kovacs), va a originar un compuesto de memoria amarillo-avermelhado.
    • Investiga de urease : las bacterias con urease van hidrolisar la ureia, con producción de compuestos de amónia que van alcalinizar el medio.
    • Investiga de coagulase : la presencia de esta enzima indica patogenicidade; en la presencia de sangre/plasma, los productores de coagulase (como el Staphylococcus aureus) van a desencadenar los mecanismos de la coagulação.
    • Investiga de enzimas hidrolíticas: esta prueba tiene su principal aplicación en la caracterización de especies del género Streptococcus, algunos de los cuales elaboran enzimas hemolíticas.
    • Metabolismo lipídico: Investiga de lipase y lecitinase.

La mayoría de los laboratorios clínicos produce las diversas pruebas bioquímicas a partir de substratos liofilizados comercializados por diversas empresas del ramo. Sin embargo, actualmente, ya existen empresas que comercializan esas pruebas bioquímicas listas para uso individualmente o esas pruebas están disponibles en kits comerciales (Ejemplo: galerias API de la Biomeriéux; Crystal de la Becton Dickinson; etc.), y consisten en un conjunto de criptas o cavidades con substratos liofilizados, cuyo metabolismo se pretende estudiar, y un indicador para verificar el cambio de memoria después de incubação en estufa microbiológica a 35 ºC.